家禽常用生物制品合理使用-第20部分
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【用法与用量】 肌内注射，1克本品经适量生理盐水或黄芪多糖注射液稀释，可用于雏鸭2 000羽，成鸭1 000羽，重症剂量加倍，连用2～3天。混饮时药量加倍，稀释后溶于水中，每日1次，连用2～3天。
【贮藏与有效期】 常温或冷藏保存，有效期为36个月。
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（十）禽肽（禽流感、传染性法氏囊病和新城疫三联卵黄抗体）（）
【制备方法】 本品为卵黄免疫球蛋白冻干粉，是禽流感、传染性法氏囊病和新城疫三联抗体。系采用禽流感病毒、传染性法氏囊病毒、新城疫病毒浓缩精制抗原免疫健康蛋鸡，收集鸡蛋，分离卵黄，用水稀释法结合硫酸铵盐析法分离纯化，结合化学灭活、高速离心、超滤等现代生物技术，浓缩精制的卵黄抗体，经冷冻干燥而成，抗体IgY含量≥10｛L…End｝ 9
CFU/克。
【物理性状】 本品为白色或类白色疏松团块。
【作用与用途】 主治禽流感、传染性法氏囊病及新城疫，尤其对各种强毒和超强毒株引起的重度感染和后期衰竭有非常独特的疗效。效价高，且针对性强，作用迅速，能迅速控制死亡率，体内维持时间长。
【用法与用量】 1克本品经适量生理盐水或黄芪多糖注射液稀释，可用于雏鸡2 000羽，成鸡1 000羽，重症剂量加倍，连用2～3天。混饮时药量加倍，稀释后溶于水中，每日1次，连用3～5天。
【贮藏与有效期】 在4℃～8℃条件下冷藏保存，有效期为36个月。
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（十一）精制鸡卵黄抗体冻干粉（5N1和9N2二价卵黄抗体）（）
【制备方法】 本品系采用免疫学技术将H5N1亚型病毒和H9N2亚型病毒多次免疫健康蛋鸡，收集鸡蛋，分离卵黄，用水稀释法结合硫酸铵盐析法，在保证抗体生化结构的完整以及生物活性良好存在的前提下，彻底去除垂直传播病原，结合化学灭活、高速离心、超滤等现代生物技术，浓缩精制而成的抗H5N1 亚型病毒、抗H9N2亚型病毒的二价卵黄抗体。
【物理性状】 本品为亮黄色粉晶体状冻干粉，遇水可快速溶解。
【作用与用途】 主要预防及治疗家禽流行性感冒，尤其对H5N1亚型病毒和抗H9N2亚型病毒引起的重度感染、后期衰竭有非常独特的预防及治疗效果。
【用法与用量】 肌内注射，每2克本品用200毫升生理盐水或黄芪多糖稀释，可用于治疗鸡200千克，可预防鸡400千克。病情严重需遵兽医加量。若有细菌混合感染可配合抗生素同时使用。
【贮藏与有效期】 阴凉、干燥处保存，有效期为5～8年。
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（十二）精制鸡卵黄抗体注射液（5N1和9N2二价卵黄抗体）（）
【制备方法】 本品系采用免疫学技术将H5N1亚型病毒和H9N2亚型病毒多次免疫健康蛋鸡，收集鸡蛋，分离卵黄，用水稀释法结合硫酸铵盐析法，在保证抗体生化结构完整以及生物活性良好存在的前提下，彻底去除垂直传播病原，结合化学灭活、高速离心、超滤等现代生物技术，浓缩精制而成的二价卵黄抗体。
【物理性状】 本品为微黄色粉或白色液体。
【作用与用途】 主要预防及治疗家禽流行性感冒，尤其对H5N1亚型病毒和抗H9N2亚型病毒引起的重度感染、后期衰竭有非常独特的预防及治疗效果。
【用法用量】 肌内注射，250 毫升本品可治疗禽流感病鸡250只，预防时可用于500只。病情严重需按兽医要求加量，若有细菌混合感染可配合抗生素同时使用。
【贮藏与有效期】 常温下可保存6～12个月，在2℃～8℃条件下冷藏可保存18个月。
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（十三）鸭病毒性肝炎精制卵黄抗体（AV 2111？30株）（）
【主要成分】 本品主要含鸭病毒性肝炎抗体，中和抗体效价≥1 ∶ 256。
【物理性状】 本品为略带棕色或淡黄色透明液体，放置48小时后瓶底有少许微细白色沉淀。
【作用与用途】 用于治疗和紧急预防鸭病毒性肝炎。
【用法与用量】 皮下或肌内注射均可。紧急预防时1日龄雏鸭每只0。5毫升，2～5日龄雏鸭每只0。5～0。8毫升。治疗感染发病的雏鸭，每只1～1。5毫升。
【不良反应】 无可见不良反应。
【注意事项】 ①本品注射后，被动免疫保护期为5～7 天。②本品口服无效。③本品可连续应用2～3次。④本品应用后对鸭病毒性肝炎弱毒疫苗接种有干扰作用，7天内不宜接种鸭病毒性肝炎弱毒疫苗。⑤本品可与抗菌药物混合后一次注射。⑥本品久置后瓶底有微量白色沉淀，对疗效无影响。
【贮藏与有效期】 在2℃～8℃条件下遮光保存，有效期为18个月。
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（十四）非特异性卵黄抗体干粉（）
【制备方法】 本品是用不同抗原免疫产卵母鸡后，在其体内产生相应抗体并转移积累于卵黄中。采用沉淀法，并经喷雾干燥工艺制备成卵黄抗体干粉，再与益生菌组合而成的固体制剂。本产品能充分发挥免疫球蛋白的非特异性免疫及相应生理促进功能，从而起到对病原体的协同免疫作用，达到预防和治疗感染性疾病的功效。本品无污染、无耐药性、无残留，药效持续时间长，可有效代替抗生素。有益菌大于1亿个/克，非特异性卵黄抗体不低于1 ∶ 320。
【作用与用途】 在临床上已广泛用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性鼻炎、心包炎、大肠杆菌病、小鹅瘟、鸭传染性浆膜炎、输卵管炎等以及慢性呼吸道疾病的紧急治疗和预防，效果显著。可增强家禽抗病能力，减少家禽疫病的发生。
【用法与用量】 本品100克混合600千克饲料，让禽自由采食，连用3～6天。饮水时用本品100克混于1 000升水中，供禽自由饮用，连用3～6天。疫情高发期可倍量使用。
【不良反应】 无可见不良反应。
【贮藏与有效期】 在2℃～8℃条件下遮光保存，有效期为18个月。
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一、禽流感病毒5亚型反转录？聚合酶链式反应检测试剂盒（）
【主要成分】 变性液1瓶（6毫升），酚、氯仿、异戊醇混合液1瓶（6毫升），异丙醇1瓶（9毫升），75％乙醇2瓶（10毫升/瓶），焦碳酸二乙酯（DEPC）1管（500微升），2摩/升醋酸钠溶液（pH值4）1管（700微升），阳性对照1管（100微升），阴性对照1管（100微升），反转录？聚合酶链式反应体系22管（22。5微升/管），6倍上样缓冲液1管（100微升），扩增对照1管（30微升）。
【作用与用途】 适用于可能感染H5亚型禽流感病毒的咽喉拭子、泄殖腔拭子、组织、鸡胚尿囊液以及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒RNA。
【用法与判定】 ①取1。5毫升焦碳酸二乙酯处理过的离心管，加入待检样品100微升，加300微升变性液，继续加入30微升2摩/升醋酸钠（pH值4）。反复颠倒离心管4～5次，以混合均匀。②加入酚、氯仿、异戊醇混合液300微升，反复颠倒离心管3～5次，再摇晃10秒，在冰上静置15分钟。③在4℃条件下，以12 000转/分离心20分钟，吸取上清液置于另一个离心管中。④加入等体积的异丙醇，在…20℃条件下静置10～15分钟，沉淀RNA。⑤在4℃条件下，以12 000转/分离心10分钟。弃去上清液，加入75％冰乙醇，轻轻地反复颠倒离心管3～5次。⑥在4℃条件下，以12 000转/分离心5分钟，弃去上清液，用滤纸吸干管壁上的余液，真空抽干或者置于37℃条件下烘干5～20分钟。⑦加入10毫升焦碳酸二乙酯溶解RNA。⑧取2。5微升RNA转移到反转录？聚合酶链式反应体系管中。⑨置于PCR仪中，循环参数为45℃反转录45分钟，94℃预变性2分钟，94℃扩增30秒、52℃扩增45秒、68℃扩增45秒，共35个循环，最后68℃延伸8分钟。⑩取5微升聚合酶链式反应产物，混合1微升上样缓冲液，1％琼脂糖凝胶电泳分析产物，以DNA分子量Marker为参考。
结果判定，同时出现372bp和229bp大小的扩增片段时，判定为H5亚型禽流感病毒阳性，只出现229bp片段判定为其他亚型A型流感病毒阳性，只出现372bp片段判定为H5亚型疑似，无条带者判定为阴性。
【注意事项】 ①本试剂盒的RNA提取液应置于2℃～8℃条件下存放，反转录？聚合酶链式反应体系置应置于…20℃以下条件下存放，且尽量不要反复冻融。②反转录？聚合酶链式反应体系，用前要先在冰上彻底溶化，并瞬时离心将液体甩至管底。③病料的处理很重要，现地采集的病料应先进行研磨，再按照每克重量加入1毫升磷酸盐缓冲液（PBS），混匀后按10｛L…End｝ …1
～10｛L…End｝ …2
比例稀释后用于RNA的提取。棉拭子病料直接加入1毫升磷酸盐缓冲液，混合后取溶液用于RNA的提取，不需要稀释。④RNA的提取直接会影响到反转录？聚合酶链式反应的检查结果，需要特别注意提取过程的操作。⑤注意废弃物的无害化处理，可疑待检样品及其接触过的器材要消毒灭菌，防止实验室散毒；含有或沾有溴化乙锭（EB）的物品需要高温处理。注意防止操作过程中的环境污染，有条件的情况下可以使用独立房间分别进行各环节的操作，无条件时则应尽可能划分不同功能的工作区，并且电泳时要采用单独的移液器。⑥剩余的试剂及空瓶不能随意丢弃，须经加热或消毒灭菌后方可废弃。
【贮藏与有效期】 RNA提取试液应置于2℃～8℃条件下保存，反转录？聚合酶链式反应体系置于…20℃以下条件下保存，有效期均为6个月。
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二、禽流感病毒5亚型血凝抑制试验抗原与阴性、阳性血清（）
【主要成分】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒，血凝抑制效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染禽流感病毒H5亚型制备的高免血清，血凝抑制效价≥7log2。阴性血清为无特定病原鸡血清。
【物理性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块，阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于血凝抑制试验检测禽流感病毒H5亚型抗体。
【用法】
准备的材料：96孔V形（90度）微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯。
pH值7。2的0。01摩/升磷酸盐缓冲液的配制：①配制25倍磷酸盐缓冲液。称量2。74克磷酸氢二钠和0。79克磷酸二氢钠，加蒸馏水至100毫升。②配制1倍磷酸盐缓冲液。量取40毫升25倍磷酸盐缓冲液，加入8。5克氯化钠，加蒸馏水至1 000毫升，用氢氧化钠或盐酸调pH值至7。2；69千帕高压蒸汽灭菌15分钟或用微孔滤膜过滤除菌。
磷酸盐缓冲液一经使用，于2℃～8℃条件下保存不超过3周。
阿氏（Alsevers）液的配制：称量葡萄糖2。05克、柠檬酸钠0。8克、柠檬酸0。055克、氯化钠0。42克，加蒸馏水至100毫升，加热溶解后调pH值至6。1，69千帕高压蒸汽灭菌15分钟，置于2℃～8℃条件下保存备用。
1％鸡红细胞悬液的配制：采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血液，与等体积阿氏液混合，用pH值7。2的0。01摩/升磷酸盐缓冲液洗涤3次，每次洗涤后均以3 000转/分离心5分钟，之后用磷酸盐缓冲液配成1％红细胞悬液，置于2℃～8℃条件下保存备用。
抗原溶解：冻干的抗原和血清均按瓶签上标注的量，用磷酸盐缓冲液溶解。
【血凝试验及结果判定】 在 V 形微量反应板中，每孔加0。025毫升磷酸盐缓冲液。第一孔加0。025毫升抗原，反复抽打3～5次混匀。从第一孔吸取0。025毫升抗原加入第二孔，混匀后吸取0。025毫升加入第三孔，如此进行对倍稀释至第十一孔，从第十一孔吸取0。025毫升弃去。每孔加0。025毫升磷酸盐缓冲液和0。025毫升1％鸡红细胞悬液。将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温（20℃～25℃）下静置20～30分钟或在2℃～8℃条件下静置45～60分钟。在对照孔红细胞显著呈纽扣状时判定结果。结果判定时将反应板倾斜60°，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌（100％凝集）的最高稀释倍数为血凝效价。
【血凝抑制试验及结果判定】 根据血凝试验测定的效价，计算配制4个血凝单位（4HAU）抗原。血凝效价除以4即为含4个血凝单位抗原的稀释倍数。例如，血凝效价为1 ∶ 256，则4个血凝单位抗原的稀释倍数应是1 ∶ 64（256除以4）。第一至第十一孔加入0。025毫升磷酸盐缓冲液，第十二孔加入0。05毫升磷酸盐缓冲液。第一孔加入0。025毫升血清，充分混匀后吸0。025毫升于第二孔，依次倍比稀释至第十孔，从第十孔吸取0。025 毫升弃去。第一至第十一孔均加入0。025毫升4HAU抗原，在室温（20℃～25℃）下静置30分钟或在2℃～8℃条件下静置50分钟。每孔加入0。025 毫升 1％鸡红细胞悬液，振荡混匀，在室温（20℃～25℃）下静置20～30分钟或在2℃～8℃条件下静置45～60分钟，对照红细胞将呈明显的纽扣状沉于孔底。
以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的血凝抑制效价。当阳性对照血清的血凝抑制效价与已知效价误差不超过1个滴度、阴性对照血清效价不高于21og2 时，试验方可成立。被检血清血凝抑制效价≤31og2判为阴性；=41og2判为可疑（可疑样品应重检，重检效价≥41og2 判为阳性，≤31og2 判为阴性）；≥51og2判为阳性。
【注意事项】 ①影响血凝和血凝抑制试验的因素很多，应严格控制试验条件。每加一份试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。②准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。③用pH值7～7。2的磷酸盐缓冲液作为稀释液。④抗原和阴性、阳性血清若有污染应废弃。⑤准确配制4HAU抗原，
